ইমেজিংয়ের সময় লাইভ সেল ইমেজিং সিস্টেমে কোষের কার্যক্ষমতা বজায় রাখতে সমস্যা

লাইভ-সেল ইমেজিং বায়োমেডিকাল গবেষণা শাখা যেমন সেল বায়োলজি, নিউরোবায়োলজি, ফার্মাকোলজি এবং ডেভেলপমেন্টাল বায়োলজি অধ্যয়নরত ল্যাবরেটরিগুলিতে একটি গুরুত্বপূর্ণ বিশ্লেষণাত্মক হাতিয়ার। স্থির কোষ এবং টিস্যুগুলির ইমেজিং (যার জন্য ফটোব্লিচিং প্রধান সমস্যা) সাধারণত একটি উচ্চ আলোক তীব্রতা এবং দীর্ঘ এক্সপোজার সময় প্রয়োজন; যাইহোক, জীবিত কোষের ইমেজ করার সময় এগুলি অবশ্যই এড়ানো উচিত। লাইভ-সেল মাইক্রোস্কোপি সাধারণত চিত্রের গুণমান অর্জন এবং সুস্থ কোষ বজায় রাখার মধ্যে একটি আপস জড়িত। অতএব, একটি উচ্চ আলোকসজ্জার তীব্রতা এবং দীর্ঘ এক্সপোজার সময় এড়াতে, স্থানিক এবং অস্থায়ী রেজোলিউশনগুলি প্রায়শই একটি পরীক্ষায় সীমাবদ্ধ থাকে। ইমেজিং লাইভ কোষ অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপির জন্য বৈপরীত্য-বর্ধিত ইমেজিং পদ্ধতির একটি বিস্তৃত পরিসর জড়িত। বেশিরভাগ তদন্তে অনেক ধরণের ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করা হয় এবং এটি প্রায়শই প্রেরণ করা আলোর কৌশলগুলির সাথে মিলিত হয়, যা নীচে আলোচনা করা হবে। ইমেজিং কৌশল এবং ফ্লুরোসেন্ট প্রোবের ডিজাইনে ক্রমাগত অগ্রগতি এই পদ্ধতির শক্তিকে উন্নত করে, নিশ্চিত করে যে লাইভ-সেল ইমেজিং জীববিজ্ঞানের একটি গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার হয়ে থাকবে।

একটি গুরুত্বপূর্ণ সতর্কতা হল কৃত্রিম ফ্লুরোফোরস বা ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিনের উপস্থিতিতে আলোকসজ্জা সহ মাইক্রোস্কোপ স্টেজে থাকাকালীন কোষগুলি ভাল অবস্থায় আছে এবং স্বাভাবিকভাবে কাজ করছে তা নিশ্চিত করা। অণুবীক্ষণ যন্ত্রের মঞ্চে কোষগুলি যে অবস্থার মধ্যে রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়, যদিও ব্যাপকভাবে পরিবর্তনশীল, প্রায়শই একটি পরীক্ষার সাফল্য বা ব্যর্থতা নির্দেশ করে।

কোষের বিশেষ জৈব রাসায়নিক প্রয়োজনীয়তার উপর ভিত্তি করে বিভিন্ন সেল কালচার মিডিয়া পাওয়া যায়। কালচার মিডিয়াতে অ্যামিনো অ্যাসিড, ভিটামিন, অজৈব লবণ (খনিজ), ট্রেস উপাদান, নিউক্লিক অ্যাসিড উপাদান (বেস এবং নিউক্লিওসাইড), শর্করা, ট্রাইকারবক্সিলিক অ্যাসিড চক্র মধ্যবর্তী, লিপিড এবং কো-এনজাইম সহ বিভিন্ন উপাদান রয়েছে। টিস্যু কালচার মিডিয়াতে, একটি গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপ হল অক্সিজেনের ঘনত্ব, পিএইচ, বাফারিং ক্ষমতা, অসমোলারিটি, সান্দ্রতা এবং পৃষ্ঠের উত্তেজনা নিয়ন্ত্রণ করা। বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ মিডিয়া ফর্মুলেশনগুলিতে প্রায়ই আনুমানিক pH মান দৃশ্যমানভাবে নির্ধারণ করতে একটি সূচক রঞ্জক (যেমন, ফেনল লাল) অন্তর্ভুক্ত থাকে। পিএইচ নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি কার্বন ডাই অক্সাইড এবং বাইকার্বোনেট বাফার সিস্টেম প্রায় সমস্ত সেল লাইনের জন্য প্রয়োজন। দ্রবীভূত গ্যাসের ঘনত্ব নিয়ন্ত্রণ করতে ইনকিউবেটরে অল্প পরিমাণে কার্বন ডাই অক্সাইড (সাধারণত 5-7%) থাকে এমন একটি বায়ুমণ্ডলে কোষগুলিকে সংষ্কৃত করা প্রয়োজন। লাইভ-সেল ইমেজিংয়ের জন্য, কার্বন ডাই অক্সাইড সহ একটি উপযুক্ত বায়ুমণ্ডল সরবরাহ করা কঠিন হতে পারে এবং এটি সাধারণত একটি নিয়ন্ত্রিত বায়ুমণ্ডলের জন্য বিশেষভাবে ডিজাইন করা সংস্কৃতি চেম্বারগুলির প্রয়োজন হয়। অক্সিজেনের প্রয়োজনীয়তা কোষের লাইনের মধ্যে পরিবর্তিত হতে পারে, তবে স্বাভাবিক বায়ুমণ্ডলীয় অক্সিজেনের উত্তেজনা মাত্রা বেশিরভাগ সংস্কৃতির জন্য উপযুক্ত। অসমোলারিটির ক্ষেত্রে, বেশিরভাগ কোষ রেখার অসমোটিক চাপের জন্য একটি বড় সহনশীলতা রয়েছে, 260 এবং 320 মিলিওসোমোলারের মধ্যে অসমোলারিতে ভাল বৃদ্ধি রয়েছে। যখন কোষগুলি ওপেন-প্লেট কালচার বা পেট্রি ডিশে বেড়ে ওঠে, তখন বাষ্পীভবনের সাথে মানিয়ে নিতে হাইপোটোনিক মাধ্যম ব্যবহার করা যেতে পারে।